Protocoles - manip stades phénologiques

...

plus tard !!!

 Si le mâle ne s’accouple pas, lui reproposer une femelle le lendemain et ainsi de suite jusqu’à ce qu’il finisse par s’accoupler.

(5) Analyse des vidéos d’accouplement

 Chronométrer le temps d’activité du mâle en minutes (correspondant au temps durant lequel le mâle ne reste pas immobile).

 Chronométrer le temps d’activité de la femelle en minutes (correspondant au temps durant lequel la femelle ne reste pas immobile et fait tout sauf appeler).

 Mesurer le temps de latence avant le premier appel de la femelle (temps au bout duquel la femelle adopte la posture typique du « calling behaviour » [Ailes légèrement ouvertes et extrémité de l’abdomen pressé contre la paroi du tube]).

 Chronométrer la durée totale des appels et compter le nombre d’appels (nombre de fois où la femelle presse son abdomen contre la paroi du tube).

 Compter le nombre de contacts entre le mâle et la femelle (nombre de fois où les deux individus se touchent avec n’importe quelle partie de leur corps)

 Compter le nombre de tentatives d’accouplements (nombre de fois où le mâle essaie de s’accoupler avec la femelle, son abdomen étant recourbé et cherchant le génitalia de la femelle).

(6) Mesure du volume du spermatophore

 Une fois l’accouplement terminé, placer immédiatement le tube contenant les deux partenaires au congélateur à -20°C pendant 30 minutes pour les sacrifier.

 Disséquer la femelle pour récupérer la bourse copulatrice contenant le spermatophore du mâle transféré pendant l’accouplement.

 Mesurer le volume du spermatophore du mâle.

(7) Comptage du nombre de spermatozoïdes

 Extraire le sperme du spermatophore et compter directement le nombre de paquets de spermatozoïdes eupyrènes sous le microscope optique (G x100).

 Après dilution du sperme, compter le nombre de spermatozoïdes apyrènes dans 6 gouttes de 5µL chacune sous le microscope optique (G x400).

(8) Mesure du comportement lors du second accouplement

 Réaliser un second accouplement avec les mâles déjà passés une fois en test et qui se sont accouplés avec succès.

 Filmer la séquence depuis la mise en couple jusqu’à l’accouplement ou pendant 20 minutes maximum si aucun accouplement n’est observé.

 Après l’accouplement, laisser la femelle pondre toute sa vie dans le tube et évaluer la fécondité (nombre total d’œufs pondus) ainsi que la fertilité (nombre total d’œufs éclos).

 Si les mâles ne s’accouplent pas, leur reproposer une femelle le lendemain et ainsi de suite jusqu’à ce qu’ils finissent par s’accoupler.

(9) Cas particulier du traitement Témoin

 La survie sur le milieu témoin étant élevée, faire deux lots d’individus mâles.

 Le premier lot sera testé pour 1. Spermatophores + Spermatozoïdes et 2. Fécondité + Fertilité de la femelle avec 2 femelles vierges (accouplements à un jour d’intervalle).

 Le second lot sera testé pour 1. Fécondité + Fertilité de la femelle et 2. Spermatophores + spermatozoïdes avec 2 femelles vierges (accouplements à un jour d’intervalle).

 Si les mâles ne s’accouplent pas, leur reproposer une femelle le lendemain et ainsi de suite jusqu’à ce qu’ils finissent par s’accoupler.