Protocole extraction lipides

...

(3) Faire sécher par évaporation totale (impératif) sous flux d’azote.

(Préchauffer la plaque chauffante ou le bain-marie)

(4) Ajouter 1 mL de BF3-MeOH 12% et homogénéiser.

(5) Mettre à chauffer 10 min à 95-100°C sur plaque chauffante ou au bain-marie.

- Après refroidissement (t° ambiante), ajouter 1mL d’eau osmosée et 1 mL d’hexane. Agiter vigoureusement au moins 10 min (vortex) puis centrifuger 10 minutes à 1200 tr/min.

- Eliminer le plus possible la phase inférieure.

- Ajouter 1ml d’H2O miliQ agiter vigoureusement au moins 2 min et centrifuger à 1000tr/min pendant 10 min.

(10) Congeler à –20°C pendant la nuit (au moins 4-5h)

(11) Quand la partie aqueuse est bien congelée, récupérer rapidement la phase supérieure d’hexane et la transférer dans un tube chromacol de 2 mL

Analyse des Esters Méthyliques d’Acides Gras :

L’analyse se fait en Chromatographie en Phase gazeuse (AGILENT HP6890 avec injecteur automatique et logiciel d’intégration CHEMSTATION) sur une colonne DB wax (SGE) de 30m, id 0.25mm, film 0.25µ sous gaz vecteur hydrogène à débit constant de 2ml/mn avec un gradient de température de 60 à 250°C. Cette méthode permet de séparer 80 acides gras. L’injection (1µl) se fait par la méthode « on column » et la détection par FID. Les acides gras sont calculés par rapport à l’étalon interne C23 ou C17.

Nomenclature :

Les acides gras sont nommés en utilisant le nombre de carbones, le nombre de doubles liaisons, l’emplacement de la première double liaison comptée à partir du méthyl terminal. Ainsi, 22 :6 (n-3) est un acide gras à 22 carbones avec 6 doubles liaisons, la première étant à 3 carbones du methyl terminal.

On distingue dans les insaturés plusieurs acides gras essentiels pour la croissance et la reproduction des mollusques :

22 :6 (n-3) = DHA, docosahexanoic acid

20 :5 (n-3) = EPA, eicosapentanoic acid

20 :4 (n-6) = ARA, Arachidonic acid.