TP extraction de lipides de jaunes d'oeuf

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- A partir de la CCM1 (voir annexe) et le tableau des calculs des références frontales, nous pouvons déduire les lipides qui constituent le jaune d’œuf en comparant les migrations des produits avec la migration de l’extrait de jaune d’œuf également déposé sur la plaque de silice.

Nous voyons que le produit de l’extrait de jaune d’œuf migre beaucoup et se décompose en plusieurs tâches. C'est-à-dire qu’il est constitué de nombreux produits. Afin de les identifier nous devons comparer grâce à leurs rapports frontaux des autres produits déposés sur la plaque de silice.

Nous pouvons voir que la migration du dépôt numéro 7 de l’extrait de jaune d’œuf se fait en trois taches. Nous prenons le produit qui a été déposé à 5 reprises pour que nous soyons certains de nos résultats.

Nous observons que la première tache qui est situé au dessus du dépôt est à la même hauteur que la tache du dépôt numéro 3 : le 1,3-Diacylglycérol. Egalement nous voyons une seconde tache a la hauteur du dépôt numéro 4 et 8, cependant il y a une seule tache donc cela indique que cette tache représente le Cholestérol et le 1,2 Diacylglycérol en même temps. La dernière tâche est à égale hauteur de la migration du composé numéro 5, le Triacylglycérol.

- Pour conclure nous pouvons dire que les lipides suivant sont présents en majorité dans le jaune d’œuf.

- 1,2 Diacylglycérol (Rf : 2.1)

- le 1,3 Diacylglycérol (Rf : 3.6)

- le Cholestérol (Rf : 2.8)

- le Triacylglycérol (Rf : 6)

- Deux CCM sont nécessaires car il se trouve que lors de la CCM1 certains produits reste sur la ligne de dépôts (dépôts 6,7 et 12) et ne migrent pas car le solvant est trop apolaire afin de faire migrer les constituants. C’est pourquoi nous effectuons une seconde chromatographie dans laquelle le solvant est composé de dichlorométhane/méthanol/eau. L’eau permet d’augmenter considérablement la polarité. De plus, les dépôts sont composés d’aucun mélange. Nous observons donc que les dépôts ont migré dans cette CCM2 notamment les phospholipides comme le phosphatidylcholine et la phosphatidyléthanolamine.

- Suite à l’observation de la CCM2 nous avons pu mettre en place un tableau de résultats :

Extrait de jaune d’œuf (2 dépôts)

Extrait de jaune d’œuf (5 dépôts)

Phosphatidylcholine

Phosphatidyléthanolamine

Rapport Frontal

1ère tache : 3/6.5 = 0.46

2nde tâche : 4.1 /6.5 = 0.63

3ème tache : 5.2/6.1 = 0.85

1ère tache : 3/6.5 = 0.46

2nde tâche : 4.1 /6.5 = 0.63

3ème tache : 5.2/6.1 = 0.85

1 seule tâche : 3/6.5 = 0.46

1 seule tâche : 4.1/6.5 = 0.63

- Nous pouvons donc affirmer suite aux résultats des rapports frontaux qu’un qu’un lipide compose aussi le jaune d’œuf qui est la phosphatidylcholine. Son rapport frontal est identique à la 1ère tâche que l’on trouve sur le chromatogramme autant pour l’extrait de jaune d’œuf avec 2 dépôts qu’avec 5 dépôts ce qui valide nos pensées.

- Egalement nous voyons que la phosphatidyléthanolamine compose le jaune d’œuf puisque son rapport frontal est de 0.63 soit le même que la seconde tâche de l’extrait de jaune d’œuf. Donc ce lipide compose également le jaune d’œuf.

- La différence de migration observée entre les acylglycérols :

[pic 3][pic 4][pic 5][pic 6]

Monoacylglycérol 1,2-Diacylglycérol 1,3-Diacylglycérol Triacylglycérol

Le solvant est apolaire par conséquent les composés qui migrent le plus haut sont ceux qui sont le moins polaires. C’est pourquoi on observe que la tâche numéro 5 qui est le triacylglycérol est celle qui a migré le plus haut car il ne possedent pas de fonction –OH qui est une fonction très polaire.

Le monoacylglycérol possèdent deux fonctions –OH ce qui permet de dire que sa migration est faible car il est très polaire.

Les deux diacylglycerol possèdent tout les deux une fonction –OH. C’est pour cela qu’il migre plus que le Monoacyglycérol mais moins que le triacylglycerol.

Cependant cette fonction est placé diféremment pour le 1,2-Diacylglycérol elle est positionné au niveau du troisième carbone alors que le 1,3-Diacylglycérol sa fonction –OH est placé au niveau du deuxième carbone. Les deux Diacylglycérol possèdent également une liaison ester ce qui baisse la polarité. (cf : formules des acylglyglycérols).

- La différence de migration observée entre l’Acide Gras et le Monoacylglycérol

[pic 7]

L’Acide Gras (dépôt 1) migre plus que le monoacylglycérol. C’est un composé apolaire donc comme on l’a vu précédemment sa migration est plus importante, il possède une tête hydrophile polaire et une queue hydrophobe apolaire. Les Acides Gras possèdent une fonction –OH alors que le Monoacylglycérol en possède 2. Cette fonction très polaire permet donc d’expliquer pourquoi leur migration est différente.

- La différence de migration entre le Cholestérol et un Ester de Cholestérol

[pic 8]

[pic 9]

Cholestérol Ester de Cholestérol

L’Ester de Cholestérol possède une liaison ester (COOR’) et cela diminue sa polarité. C’est pourquoi grâce à cette propriété on peut expliquer l’invisibilité de la tache de l’Ester de Cholestérol : il s’agit d’un composé très polaire, il se confond donc avec le front du solvent de la chromatographie.

A l’inverse, le Cholestérol qui ne possèdent pas de liaison Ester, migre correctement. Sa fonction -OH lui permet de moins migrer que les produits compose d’aucune fonction-OH