Compte rendu TP : EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’ŒUF.

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Dans la 2eme CCM :

Phase mobile : solvant un peu plus polaire, il est composé de dichlorométhane/méthanol/eau (65 :25 :3), celui-ci permet la migration des composés polaires pour lesquels il aura de l’affinité.

Calculs des volumes des composés du solvant :

65+25+3=93

On divise 20 ml par 93 et on obtient 0,215 ml

_Dichlorométhane : 0,215*65=13,975

_Méthanol : 0,215*25=5,375

_Eau : 0,215*3=0,645

Ne pouvant pas être précis dans ces mesures alors on prend :

_Dichlorométhane : 13 ml _Méthanol : 5 ml _Eau :0,6 ml

Nous avons effectué sur la phase stationnaire (plaque de silice) le dépôt de 6 échantillons (4 témoins et 2 dépôts d’extrait de jaune d’œuf) qu’on mettra dans 20 ml du solvant de la phase mobile.

Cette fois pour faire migrer les échantillons polaires, nous avons utilisé un solvant contenant de l’eau (le solvant devient un peu plus polaire que la phase stationnaire (plaque de silice)) et donc les composés polaires auront plus d’affinités avec le solvant qu’avec la silice et donc seront entrainés par la phase mobile, ainsi nous pourrons déduire ou pas si ces échantillons sont présents dans notre extrait de jaune d’œuf.

À cause de probables erreurs de manipulation ou de conditions non appropriées dans la 2éme chromatographie, Il n’y a pas de migration de la phosphatidyléthanolamine (PE) qui aurait dû migrer plus loin que la phosphatidylcholine.

TABLEAU RECAPULATIF

N°

Nom du produit + nombre de dépôts

Distance parcourue par le solvant D (cm)

Distance parcourue par l’échantillon d (cm)

Rapport frontal

Rf=d/D

1

Monoacylglycérol (8 dépôts)

7,9

0

0

2

Cholestérol (8 dépôts)

7,9

0

0

3

Extrait de jaune d’œuf (2 dépôts)

7,9

3,8

0,48

4

Extrait de jaune d’œuf (5 dépôts)

7,9

3,5

0,44

5

Phosphatidylcholine (8 dépôts)

7,9

4,2

0,53

6

Phosphatidyléthanolamine (16 dépôts)

7,9

4) INTERPRETATIONS :

A partir de la 1ere CCM nous constatons que :

Le jaune d’œuf est composé de 1,3-Diacylglycérol, 1,2-Diacylglycérol, Cholestérol, et Triacylglycérol et d’ester de cholestérol (n’est pas confirmé par la 1ere CCM), cependant la Phosphatidylcholine et la Phosphatidyléthanolamine sont restés sur la ligne de dépôt et n’ont pas migré, cela peut être dû à :

1_ Les deux composés (12 et 13) ne sont pas présents dans le jeune d’œuf (ne font pas partie de ces composants).

ou

2_Les deux composés (12 et 13) sont très polaire et donc n’ont pas été entrainés pas le solvant car ils avaient une très grande affinité pour la phase stationnaire.

Pour déterminer la cause, on fait une 2eme CCM avec une phase mobile plus polaire que la phase stationnaire (on a rajouté de l’eau dans le solvant ce qui a augmenté sa polarité)

A partir de la 2eme CCM nous constatons que :

Le cholestérol n’apparait pas car il est trop apolaire par rapport au solvant qui au contraire est très polaire.

Le jaune d’œuf est composé de Phosphatidylcholine et de Phosphatidyléthanolamine (n’est pas confirmé avec la 2éme CCM) également.

Plus la tache de l’extrait de jaune d’œuf est importante plus le composé correspondant (le Rf de la tâche est le même que celui d’un témoin) est présent dans la tâche.

EXPLICATION DES MIGRATIONS :

Explication des migrations

Molécule

Les Triacylglycérols sont les acylglycérols qui migrent le plus en présence du solvant apolaire car eux-mêmes sont complétement apolaires vu que les 3 (OH) ont été remplacés par des acides gras.

[pic 1]

Triacylglycérol

L’acide gras possède un groupement OH (partie polaire) et une chaine carbonée (partie apolaire), de ce fait il migre moins loin que le triacylglycérol qui est complétement apolaire en présence du solvant apolaire.

[pic 2]

Acide gras

Le 1,2-Diacylglycérol à un seul groupement OH donc migre plus loin que le monoacylglycérol (2 OH) en présence du solvant apolaire.

Le 1,2-Diacylglycérol migre moins loin que le 1,3-Diacylglycérol même si les 2 molécules ont toutes les deux un groupement OH, cela est dû à une accessibilité différente le OH du 1,2-Diacylglycérol est plus accessible que celui du 1,3-Diacylglycérol ce qui lui permet d’être moins apolaire (plus polaire).