TP Extraction des lipides de jaune d'oeuf

...

[pic 8]

[pic 9]

Figure 1 : Molécule de chloroforme

Figure 2 : Molécule de méthanol

Parallèlement nous pesons environ 50 milligrammes (mg) de jaune d’œuf lyophilisé. Nous mélangeons le tout au vortex et après repos (décantation) nous observons deux phases : une phase inférieur sous forme de précipité ; et une phase supérieure de couleur jaunâtre et limpide : le surnageant. Le surnageant est donc la partie lipidique et le précipité la partie contenant les glucides et les protéines. Il reste à prélever, à l’aide d’un capillaire, le surnageant pour pouvoir l’analyser.

Nous passons donc à l’étape suivante : la séparation.

2. La séparation par CCM

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CCM n°1

Il est important de noter que la mise en place d’une CCM nécessite un travail en plusieurs temps.

Tout d’abord la préparation de la phase mobile d’un volume total de 20mL : le mélange hexane/éther diéthylique/acide acétique avec un rapport (70 :30 :1). L’hexane, qui est un alcane ayant uniquement des C et H, est un composé qui n’a aucune polarité. Sa présence rend donc le mélange très apolaire.

[pic 10]

[pic 11]

[pic 12]

Figure 3 : Molécule d'Hexane

Figure 4 : Molécule d'éther diéthylique

Figure 5 : Molécule d'acide acétique

Calcul des volumes de chaque composés du mélange pour le rapport (70 :30 :1) :

Vproduit = Vtotal x [pic 13]

où [pic 14] est le rapport et Vtotal = 20mL

Exemple pour l’hexane :

[pic 15] = 70

Vtotal= 20mL

Vhexane = 20 x [pic 16] = 14mL

Tableau 1 : Volumes solvant de la CCM n°1

Produits

Vproduit (en mL)

Hexane

14

Éther diéthylique

6

Acide acétique

0,2

Pour cette manipulation il est important de prendre des précautions et de la réaliser sous hotte car les produits utilisés sont relativement toxiques et nocifs. Pour ce qui est de la précision, nous ajustons de chacun des trois produits. Pour l’hexane et l’éther diéthylique nous utilisons la pipette plastique. Pour l’acide acétique, nous utilisons la pipette jaugée de 0,2 mL

Parallèlement nous préparons la phase solide dont le support est une plaque de silice (SiO2), composé très polaire. Sur cette plaque nous définissons une ligne de dépôt au crayon à papier à 1cm du bord inférieur de la plaque et des zones de dépôts espacées les une des autres de 0,8 cm. Ainsi chaque dépôt correspond à un ou plusieurs produits bien définis que nous détaillerons dans les tableaux suivants. Pour une question de précision et pour assurer une lecture correcte des résultats, les dépôts (fait à l’aide d’un capillaire) seront d’une taille inférieure à 1,5mm.

Nous mettons la phase mobile dans la cuve de chromatographie et donc introduisons la phase solide en mettant en contact la partie basse (en dessous de la ligne de dépôt) de la plaque avec le solvant. Nous fermons la cuve et nous laissons reposer en attendant la migration. La chromatographie sera arrêté lorsque le solvant arrivera à environ 1cm du haut de la plaque : c’est le front du solvant.

La dernière étape, la révélation, consiste à rendre visible les différentes tâches obtenues en utilisant le bleu de Coomassie comme colorant : un premier bain de colorant est appliqué à la plaque, puis un autre bain contenant du décolorant au chlorure de sodium (NaCl) et méthanol. Un troisième contenant du décolorant est appliqué pour une meilleure décoloration. Cette coloration-décoloration permet donc la révélation d’une ou de plusieurs taches selon le composé.

Les tableaux suivants ont été réalisés à la suite de l’obtention et de la lecture de notre chromatogramme.

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Tableau 2 : Distances des tâches de la CCM n°1

Zone de dépôt

Produit(s) déposé(s)

D

d (tâche 1)

d (tâche 2)

d (tâche 3)

d (tâche 4)

1

AG

8

x

x

x

x

2

MAG

8

0,2

x

x

x

3

1,3 - DAG

8

1,8

x

x

x

4

1,2 - DAG

8

1,8

1,4

x