Identification d’une ENTEROBACTERIACEAE

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Nous pouvons donc en conclure que la Souche D appartient à la famille des Enterobacteriaceae car elle dispose des critères suivants :

- FORME : BACILLE

- COLORATION: GRAM -

- OXYDASE –

- Identification du genre et de l’espèce de la souche d’Enterobacteriaceae :

- Ensemencement de deux boîtes de Pétri :

Au préalable, nous avons préparé un inoculum à l’aide de la souche D et couler une gélose nutritive sur deux boîtes de Pétri. Nous avons ensuite utilisé notre inoculum pour ensemencer les deux boîtes de Pétri grâce à la méthode des cadrant.

En réalité nous avons pu utiliser seulement une seule boîte de pétri, car la deuxième ne voulait pas prendre en masse.

Résultats après 24h d’incubation à 37°C :

[pic 9]

Taille

0,005 cm à 0,1 cm

Forme

[pic 10][pic 11]

Elévation

[pic 12]

Bord

[pic 13]

Couleur

Blanc transparent

NB : A l’observation macroscopique, nous devions voir une série de colonie isolée, non visible sur notre boîte de Pétri .

- Ensemencement du Milieu VF :

Il permet de mettre en évidence le type respiratoire de la bactérie étudiée.

Résultats après 24h d’incubation à 37°C :

[pic 14]

Les bactéries ont poussé sur toute la hauteur du tube, les bactéries sont de types aérobie-anaérobie facultative. Cette expérience démontre donc que la souche D est de type aérobie-anaérobie facultative.

- Ensemencement des deux milieux Hugh et Leifson :

Ces deux milieux permettent de mettre en évidence deux processus :

- La voie respiratoire

- La voie fermentative

Résultats après 24h d’incubation à 37°C :

[pic 15]

On peut observer que les deux types sont jaunes, le glucose a été dégradé par les bactéries en aérobiose et en anaérobiose, les bactéries ont donc un métabolisme fermentaire.

Le culot est jaune dans les deux tubes. La bactérie a fermenté le glucose dans le tube où il y'a de la paraffine, elle est donc capable de l'utiliser en l'absence d'O2. Le tube sans paraffine confirme qu'elle est capable de l'utiliser en présence d'O2.Elle est dite Fermentative du glucose c'est à dire de type fermentatif.

- Ensemencement de la galerie API20E :

La galerie Galerie de 20 microtubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram – appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE. API 20 E est un système standardisé pour l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques miniaturisés, ainsi qu'une base de données. Les galeries Api utilisent plusieurs types de tests : étude de la fermentation de divers glucides, recherche directe d'une enzyme. Chaque tubule contient un substrat différent sur lequel le micro-organisme considéré va réagir. Ils sont remplis d'une suspension bactérienne calibrée. Pour les substrats dont le sigle est encadré, la cupule doit aussi être remplie de manière à créer un ménisque. Pour les substrats dont le sigle est souligné, la cupule doit être remplie d'huile de paraffine soit pour créer l'anaérobiose (absence d'oxygène), soit pour maintenir en solution les ions volatils produits par la réaction et ainsi assurer le virage de l'indicateur coloré de pH.

Résultats après 24h d’incubation à 37°C :

[pic 16]

[pic 17]

En conclusion :

D’après l’interprétation de nos résultats, nous pensons que la bactérie est une Escherichia Coli 2 appartenant à la famille des Enterobacteriaceae. Nous avons donc identifié la souche D comme la souche représentative de la famille des Enterobacteriaceae.

Compte Rendu de :

Dhaisne Margaux

Zarhane Zina

Groupe 3