Compte rendu de TP

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→ Une fois vide, déposer 2 mL de solution présente dans les flacons préalablement aliquoter. Allumer la lumière et enregistrer.

Dans cet échantillons nous n’avons aucun donneur d’électrons, donc on ne devrait avoir aucun déplacement d’oxygène, donc aucune activité. On devrait donc apercevoir aucune pente, voir une très faible.

Puis vider et rincer 3 fois avec de l’eau distillée.

→ Déposer 2 mL d’un 2ème flacon et y ajouter 10 µL de ferricyanure. Allumer la lumière et enregistrer.

Le ferricyanure est un donneur d’électrons. Compo : (Fe(III)CN)63-) : 30 mM dans l’eau ; E’m = + 430 mV.

Puis vider et nettoyer 2 fois à l’eau distillée.

→ Déposer 2 mL d’un 2ème flacon et y ajouter 10 µL de DCBQ. Allumer la lumière et enregistrer.

Le DCBQ est un donneur d’électrons. Composition : (dichloro-p-benzoquinone) : 20 mM dans l’éthanol ; Em’ = + 300 mV.

Puis vider et nettoyer 2 fois à l’eau distillée.

→ Déposer 2 mL d’un 2ème flacon et y ajouter 10 µL de ferricyanure + 10 µL de DCBQ. Allumer la lumière et enregistrer. Puis vider et nettoyer 2 fois à l’eau distillée.

→ Déposer 2 mL d’un 2ème flacon et y ajouter 10 µL de ferricyanure + 10 µL de DCBQ + 10 µL de DCMU. Allumer la lumière et enregistrer.

Composition (Diuron 3-(3,4-dichlorophényl)-1,1-diméthylurée) : 10 mM dans l’éthanol.

Puis vider et nettoyer 2 fois à l’eau distillée.

III. Calculs

- Solutions

- Préparation du Milieu A

→ AH : Solution basique du tampon phosphate

NaCl m= n x M = CVM ⬄ m = 58,44 x 50.10-3 x 50.10-3 = 146 mg

Sucrose m = CVM = 342,3 x 0,3 x 50.10-3 = 5,13 g

Na2PO4 m = CVM = 141,96 x 50.10-3 x 50.10-3 = 355 mg

→ AH2 : Solution acide du tampon phosphate

NaCl m = CVM = 58,44 x 50.10-3 x 50.10-3 = 146 mg

Sucrose m = CVM = 342,3 x 0,3 x 50.10-3 = 5,13 g

NaH2PO4 m = CVM = 137,99 x 50.10-3 x 50.10-3 = 345 mg

- Préparation Milieu B

50 mL de MgCl2 à 5 mM

On a : Ci = 250 mM et on sait que F = = = = 50 ⬄ Vi = = = 1 mL[pic 1][pic 2][pic 3][pic 4][pic 5]

Donc 1 mL de MgCl2 + 49 mL d’eau distillée.

- Préparation Milieu C

100 mL de : 10 mM de NaCl ; 5 mM de MgCl2 ; 20 mM de HEPES à 7,5

NaCl m = CVM = 10.10-3 x 100.10-3 x 58,44 = 58 mg

MgCl2 m= CVM = 5.10-3 x 100.10-3 x 94 = 47 mg

HEPES m= CVM = 20.10-3 x 100.10-3 x 238,3 = 477 mg

b) Spectrophotométrie

3 ) On sait que on a pris 100 µL de la solution de suspension pour faire la solution de 10 mL d’extraction. Donc Vf = 10.10-3 et Vi = 100.10-6

F= = = 100.[pic 6][pic 7]

D’où [Chl]t = x F = x 100 = 8,9 mg/mL[pic 8][pic 9]

[Chl]a = 0,0127 Do663 – 0,00269 Do645 = [(0,0127 x 0,567) – (0,00269 x 0,232)] x F = 0,667 mg/mL

[Chl]b = 0,0229 Do645 – 0,00468 Do663 = [(0,0229 x 0,232) – (0,00468 x 0,567)] x F = 0,266 mg/mL

- Mesure d’activité photosynthétique

→ On veut 10 mL de suspension thylakoïdes à 0,1 mg/mL

On a : Ci = 8,9 mg/mL (Cf III.Calculs – b) 3) – [Chl]t)

Or Ci x Vi = Vf x Cf ⬄ Vi = = = 0,112 mL = 112 µL[pic 10][pic 11]

⬄ Prélever 112 µL de solution de suspension à mettre dans 10mL d’eau distillée.

→ Calculs d’activités