Filtration sur échangeur d’ions (application à la purification du lysozyme d’œuf)
Par Ramy • 20 Novembre 2018 • 1 497 Mots (6 Pages) • 540 Vues
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Une dernière mesure de densité optique à 450 nm a été réalisée pour les fractions F1 et F2 pures ou diluées. En effet, cette cinétique a été réalisée afin de caractériser quantitativement ces fractions notamment par leur activité spécifique du lysozyme. Pour chaque mesure de densité optique, une suspension de Micrococcus lysodeikticus de 1,9 mL a été ajouté.
Le lysozyme catalyse l’hydrolyse des peptidoglycanes engendrant une destruction de la paroi chez les bactéries. Micrococcus lysodeikticus est sensible à l’action du lysozyme, c’est pourquoi cette souche a été choisi pour mesurer l’activité spécifique des fractions.
Tableau III : Tableau récapitulatif de la cinétique expérimentale du lysozyme au sein de l’extrait brut et des fraction F1 et F2
Fractions
DO450 à t0
DO450 à t0+1
∆DO450
∆DO450,moy
EB1/4
0,451
0,446
0,410
0,403
0,041
0,043
0,042
EB1/5
0,453
0,448
0,415
0,414
0,038
0,034
0,036
F1 pure
0,460
0,457
0,462
0,456
0,002
0,001
0,0015
F2 pure
0,452
0,441
0,392
0,378
0,060
0,063
0,0615
F21/2
0,448
0,456
0,418
0,413
0,030
0,043
0,0365
Tableau IV : Tableau récapitulatif de toutes les valeurs de ce TP :
EB
F1
F2
Volume (mL)
10
29
19
Protéines
Concentration (mg/mL)
5,178
1,5108
0,2270
Totales (mg)
51,78
43,81
4,31
% récupéré
100
84,61
8,32
UA/mL
87
0
33,625
Totale AT (UA)
870
0
638,44
% récupéré
100
0
73,39
AS (UA/mg)
16,8
0
148,13
Facteur de purification de F2
8,82
La quantité totale de protéines est calculée en multipliant la concentration en protéines par le volume de la solution :
quantité de protéines de l’échantillon = 5,178*10 = 51,78 mg
Comme l’extrait brut est notre solution référence pour le calcul des pourcentages des solutions F1 et F2, on considère que le pourcentage récupéré est de 100%.
Le pourcentage de la solution F1 est est obtenu en multipliant le pourcentage de référence par la quantité totale de protéines présente dans la solution F1 qui est divisée par la quantité de protéines totale présente dans la solution EB :
pourcentage récupéré = (100*43,81)/51,78 = 84,61%
L’unité d’activité du lysozyme est calculée de la manière suivante :
1 UA => 0,001
X UA => 0,042
X = (1*0,042)/0,001 = 42 UA
0,042 est la valeur de DO moyenne obtenue pour la solution EB à la dilution ¼, puis on réalise ensuite le même calcul pour la solution EB à la dilution ⅕, où on obtient 36 UA.
Il faut ensuite calculer la moyenne d’UA pour la solution EB, sans oublier de prendre en compte le facteur de dilution :
UA = (42*4+5*36)/2 = 174 UA pour 2 mL
Donc on obtient 87 UA/mL
L’activité totale est obtenue en multipliant l’unité d’activité du lysozyme par le volume
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