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TP PURIFICATION DU LYSOZYME

Par   •  9 Novembre 2017  •  949 Mots (4 Pages)  •  299 Vues

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...

Grace au graphique on voit que l’activité enzymatique est proportionnelle à la quantité d’enzyme jusqu’à …U. Au-dessus de cette valeur, l’activité tend à être constante car la concentration en enzyme devient très important par rapport à la quantité de substrat et n’a alors plus d’impact sur l’activité enzymatique.

Dans la suite du TP, si ΔAcorrigé devient supérieure à 0.160, on va diminuer la quantité d’enzyme afin d’obtenir une absorbance comprise dans la gamme de l’activité enzymatique.

- Activité enzymatique pour les fractions

Fractions

F1

F2

F3

F4

F5

Substrat

1.9

1.9

1.9

1.9

1.9

NaCl

Prises d’essais (µL)

20

100

100

100

100

ΔAcorrigé/min

0.1050

0.0005

0.0032

0.0041

0.0225

Activité enzymatique (U)

105

0.5

3.2

4.1

22.5

Dans la fraction F1, l’activité enzymatique est la plus importante parce que c’est la fraction qui contient tout le lysozyme. On remarque une augmentation de l’activité enzymatique en F5, qui peut être due à un détachement de l’enzyme ou bien lors de élimination de surnageant, nous avons dû pipette de la résine.

E1

E2

E3

E3’

E4

Substrat (mL)

1.9

1.9

1.9

1.9

1 .9

NaCl

1.07

1.07

1.07

1.07

1.07

Prises d’essais (µL)

30

30

30

7

30

ΔAcorrigé/min

0.0074

0.0104

0.4000

0.150

0.0240

Activité enzymatqiue (U)

7.4

10.4

400

150

24

Dans les fractions d’élution, c’est la fraction E3 qui contient la plus grande activité enzymatique. Ceci nous indique que le lysozyme contenu dans F1 a été éluer lors de cette fraction. Afin que l’activité enzymatique de E3 soit comprise dans la gamme de la linéarité, nous avons diminué la quantité d’enzyme (prises d’essais) à 7 µL. La différence d’activité enzymatique entre F1 et E3 s’explique par le fait que le lysozyme est plus concentré dans E3 que dans F1. Après avoir mesuré l’activité enzymatique de E4, on a eu une activité enzymatique faible. C’est pourquoi on en a déduit que le lysozyme a été en très grande partie éluée lors de la fraction E3.

- Gamme étalon

Tubes

1

2

3

4

5

6

BSA (µg)

0

2

4

6

8

10

Volume BSA (µL)

0

20

40

60

80

100

L’eau (qsp (500 µL)

500

480

460

440

420

400

Réactif (µL)

500

500

500

500

500

500

ΔAlue

0.406

0.512

0.614

...

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