Technique biologique
Par Christopher • 6 Décembre 2018 • 3 968 Mots (16 Pages) • 699 Vues
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- Protocole :
- Etaler en couche mince jusqu’à rendre le matériel transparent.
- Déposer le matériel sur une lame avec une goutte d’eau physiologique.
- Recouvrir d’une lamelle.
- Possibilité d’utiliser des colorants.
- NB : Colorants les plus utilisés pour le matériel vivant :
- Vert Janus : Met en évidence les mitochondries.
- Rouge neutre : Met en évidence les lysosomes.
- Coupes histologiques.
Coupe histologique : Permet l’observation d’organes et de tissus. Devra être mince et transparente.
- Protocole : peut se diviser en 7 étapes :
- Prélèvement.
- Fixation.
- Déshydratation.
- Inclusion.
- Microtomie.
- Réhydratation.
- Coloration.
- Prélèvement.
- Prélèvement (étape 1) : Façon d’acquérir l’échantillon.
Quatre catégories majeures :
- Frottis = grattage (organisme vivant quand prélèvement).
- Biopsies = fragments prélevés (organisme vivant quand prélèvement).
- Directement (peau) ou par endoscopie (organes, appareils respiratoire, circulatoire, etc.) (organisme vivant quand prélèvement).
- Ponction = à l’aiguille (liquide pleural, ganglions, etc.).
- Organes en intégralité.
- Fixation.
- Fixation (étape 2) : stabiliser les structures en maintenant l’intégrité générale des tissus (constituants chimiques, forme, etc.) et en évitant la lyse.
- Deux grands types de fixation :
- Fixations physiques.
- Fixations chimiques.
- Fixations physiques :
- Congélation (-20°C à -180°C).
- Empêche l’autolyse.
- Durcit le prélèvement.
- Idéal pour la biopsie.
- Congélation à l’azote liquide (-195,79°C).
- Bain de glycérol pour protéger (cryoprotection).
- Garde l’intégralité du tissu.
- Echantillon peut rester fixé pendant des années sans altération.
- Fixations chimiques : Vitesse de fixation et de pénétration = facteur le plus important.
- Volume de fixateur = très important (en général Vfixateur = 5 fois supérieur à Vtissu)
- Ethanol (C2H6O) :
- Bien pour les glucides.
- Utilisé pour les frottis.
- Inadapté pour les liquides.
- /!\ Durcit les tissus → Non adapté pour les pièces histologiques.
- Formol (CH2O) :
- Economique.
- Incolore.
- Permet la fixation de grosses pièdes.
- Pénètre rapidement les tissus → peut les dégrader.
- Produit cancérogène !
- Précautions très nombreuses.
- Glutaraldéhyde (C5H8O2) :
- Plus stable que le formol.
- Pénètre peu et lentement → fixe bien les tissus.
- Réaction irréversible.
- Inadapté pour étudier les activités enzymatiques.
- Fixateur de Carnoy (Chloroforme – Ethanol absolu – Acide acétique) :
- Mélange ancien (1887).
- Pénètre lentement mais fixe rapidement.
- Adapté pour les tissus peu denses et de petite taille.
- Composition :
Chloroforme (3 volumes)
Ethanol absolu (6 volumes)
Acide acétique cristallisable (1 volume)
- Fixateur de Bouin-Hollande :
- Mélange ancien (1918).
- Pénètre rapidement mais fixe lentement.
- Convient bien aux tissus denses (muscle, cerveau, etc).
- Composition :
- Eau distillée 10 cm^3
- Acétate neutre de cuivre 2,5 g
- Acide picrique 4 g
- Formol à 40% 10 cm^3
- Acide acétique cristallisable 1 cm^3
- Déshydratation.
- Déshydratation (étape 3) : étape nécessaire car la plupart des milieux d’inclusion (étape 4) sont hydrophobes.
- Réalisations de bains d’alcool par palier.
- L’alcool va progressivement remplacer l’eau.
- Inclusion.
- Inclusion (étape 4) : Entourer l’échantillon par une substance dure pour pouvoir réaliser des coupes fines et régulières.
- Utilisation de paraffine : liquide à 58°C et solide a T° ambiante.
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