Analyse des gènes

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Nous avons dilué une nouvelle fois notre échantillon au 1/50ème, puis nous avons obtenu une absorbance de 0,34 avec un ratio A260/A280 de 1,66. Notre facteur de conversion étant 1 unité de DO à 260 nm = 40 µg/mL d'ARN, la concentration d'ARN dilué au 1/50ème était de 13,5890 µg/mL.

DISCUSSION

Le chloroforme a pour rôle de solubiliser la membrane plasmique du tissus. En étant plus dense que les autres produits contenus dans le tube, il va alourdir certaines molécules telles que l'ADN et les protéines, afin de les disposer au fond du tube. Ce qui nous permettre plus tard de bien distinguer les 3 phases.

L'isopropanol interagit avec les acides nucléique et va donc faire précipiter l'ARN lorsqu'il est en contact avec celui-ci, d'où la formation d'un précipité blanc.

Nous avons utilisé de l'éthanol 75 % afin de dissoudre certains sels qui ont été utilisés pendant les étapes précédentes.

Nous avons effectué une deuxième dilution au 1/50ème car les résultats de DO pour la première dilution au 1/10ème n'étaient pas significatifs. Ainsi, à partir de la concentration finale de 13,5890 µg/mL, nous avons calculé la concentration d'ARN de notre échantillon initiale :

Ci = Cf x Facteur de dilution = 13,5890 x 50 = 679,45 µg/mL

Nous avons mesuré les absorbances à différentes longueurs d'onde : 260 nm pour la quantité d'ARN, 280 nm pour la quantité de protéines et 230 nm pour la quantité de composés organiques. Cependant, nous n'avons pas la possibilité de quantifier l'ADN puisqu'il absorbe à la même longueur d'onde que l'ARN. Nous avons ainsi obtenu un ratio A260/A280 de 1,66.

Un ARN bien purifié correspond à un ratio compris entre 1,7 et 2. Dans notre cas, nous pouvons affirmer que l'ARN a été correctement purifié.