CR TP Filtration
Par Andrea • 27 Novembre 2018 • 1 552 Mots (7 Pages) • 795 Vues
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On sait que E= 6,6 pour une solution à 1% soit 1g/100 mL. D’où A=ElC équivaut à C= A/El avec C en g/100mL.
Exemple du tube non dilué 6 : C= 0,6/(6,6*1)= 9,2.10-2 g/100mL soit 0,92 mg/mL.
On fait de même pour tous les autres tubes en multipliant par leur facteur de dilution, et on obtient le tableau suivant :
Tableau brouillon
La moyenne obtenue est de 0,93 mg/mL.
On peut alors en déduire les quantités réelles de BSA contenues dans les tubes de la gamme étalon.
Exemple du tube 1 de la gamme étalon : 10 µL de BSA sont ajoutés. Nous avons donc une quantité réelle qui n’est pas de 10 µg mais : T=m/V d’où m=TV= 0,93*10=9,3 µg.
Même principe pour les autres tubes. Voir tableau de la gamme étalon.
- Dosage par la méthode de Lowry :
On souhaite réaliser une gamme étalon. On obtient le tableau suivant :
Tableau au brouillon
On trace alors la courbe Absorbance corrigée= f(quantité réelle). Voir figure2 en annexe. On obtient une droite passant par 0 donc l’absorbance est proportionnelle à la quantité de protéine.
Après mesures de l’absorbance des 2 prises d’essai de la solution de départ et du filtrat, on obtient :
Tableau au brouillon
Pour corriger l’absorbance, nous utilisons l’absorbance du blanc de la gamme étalon.
Pour calculer la concentration de protéines, on a T=m/V avec V= 30 µL.
Exemple avec la solution de départ : T= 31/30= 1,03 mg/mL.
On détermine ainsi le rendement protéique de la filtration :
r= T(filtrat)/T(solution de départ) *100 = …%.
- Dosage du DTT par le DTNB :
L’équation de la réaction entre le DTT et le DTNB est la suivante : voir tp internet
Le TNB est un chromophore qui absorbe à 412 nm. Nous mesurons donc l’apparition de ce produit.
PLACE POUR PROBLEME DE TEMOIN !!!!
On a le tableau suivant :
Tableau brouillon
On trace ainsi la courbe Absorbance corrigée moyenne= f(volume de la prise d’essai). Voir figure3 en annexe. On obtient une droite passant par 0 donc l’absorbance est proportionnelle au volume de la solution de départ et donc de la quantité de TNB produit. On en déduit la concentration de TNB pour chaque prise d’essai.
D’après l’équation de la réaction, 1 mol de DTT donne2 mole de TNB donc la quantité molaire de TNB produite et ainsi la concentration est égale au double de celle de DTT.
Exemple du tube 1 : [DTT]=A/El=[…/(13,6.10^3*1)] /2=… mol/L.
Même principe pour les autres tubes.
PLACE POUR PROBLEME TEMOIN !!!!
On a alors :
Tableau brouillon comme le tableau2
On fait de même avec le filtrat, on a le tableau suivant :
Tableau semblable mais avec 1 seule mesure au lieu de 2, et ligne avec [DTT] obtenue.
On trace la courbe Absorbance corrigée= f(volume de la prise d’essai). Voir figure 4 en annexe. On en déduit la [DTT] pour chaque tube reportée dans le tableau précédent.
On remarque que la [DTT] est nettement plus faible dans le filtrat que dans la solution de départ, donc l’élimination rapide a fonctionné. On détermine le rendement de filtration du DTT pour chaque tube et on fait une moyenne.
r(tube)= [DTT](filtrat)/[DTT](solution de départ) *1OO.
Exemple avec le tube 1 : r(tube1)= [DTT](filtrat1)/[DTT](solution de départ1) *1OO = …%.
Tableau pour résultat des rendements obtenus
La moyenne des rendements de chaque tube est donc :
r= (r1+r2…)/7= … %.
Le rendement moyen de filtration du DTT est donc de … %. On a donc éliminé (100-r(filtration)) … % de DTT. Commentaire.
- Efficacité de la méthode :
Pour permettre une bonne efficacité de la méthode, il faut que les molécules à séparer soient de tailles largement différentes : une petite molécule (DTT) et une macromolécule (protéine). On peut ainsi correctement les séparer sur gel filtration : la macromolécule étant grosse, elle est vite éluée ; et la petite molécule étant incluse dans les pores, elle sera éluée plus tard. Il faut également manipuler de faibles volumes.
Conclusion
On peut donc dire que l’élimination rapide du DTT de la solution protéique a très bien fonctionné. Nous avons récupéré une solution contenant encore … % des protéines initialement contenues, et nous avons éliminé … % du DTT initialement contenu.
De plus, en termes de volumes, nous avons récupéré un filtrat de … µL pour une solution de départ de 120 µL.
La
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