TP: phosphatase alcaline.
Par Plum05 • 28 Mai 2018 • 1 171 Mots (5 Pages) • 1 158 Vues
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III-Résultats
Le principe de la dilution en cascade consiste à composer des solutions filles à partir d’une solution mère avec une concentration définie. Puis de diminuer la concentration de solution en solution tout en laissant un certain volume restant dans la solution précédente afin d’effectuer les différentes manipulations.
Solution mère
1
2
3
4
5
6
Concentration de la solution Sn en mM
5
2,5
1
0,5
0,25
0,175
0,125
Volume Sn-1 (mL)
/
15
12
15
15
14
10
Volume H2O
/
15
18
15
15
6
4
Volume total = Volume H2O + Volume Sn-1
/
30
30
30
30
20
14
Volume Sn+1 (en mL)
15
12
15
15
15
10
/
Volume restant = Volume total - volume Sn+1
/
18
15
15
15
10
/
En définissant le volume total à prélever, il fallait respecter différentes consignes émises dans l’énoncé de tel sorte que le volume prélevé de la solution précédente devra être compris entre 10 et 20 mL. Ainsi le volume restant devra être compris entre 10 et 20 mL également.
Nous avons donc pris la moyenne de ces 2 conditions. Soit une moyenne de 15 mL ce qui forme un volume total de 30 mL.
Les différents calculs pour les valeurs de volume seront expliqués pour le tube 1 et 2. Car la dilution en cascade pour les autres tubes suivent le même principe.
Pour déterminer le volume Sn-1, nous nous aidons de l’application suivante.
I-Etude cinétique de la libération des produits de la réaction
Tube
1
2
3
4
5
6
Concentration de pNP (μM)
0
6,25
12,5
25
37,5
50
Absorbance lue
0,071
0,172
0,277
0,49
0,678
0,859
Absorbance corrigée
0
0,101
0,206
0,419
0,607
0,788
Tableau récapitulatif des valeurs d’absorbance de la gamme étalon
Tableau de concentration de pNPP dans la cuve et le milieu réactionnel.
Explication des différents calculs
Commentaire figure 2
Commenter l’évolution des graphiques de A à G tout en expliquant que les temps de réaction ne sont pas les même car à concentrations différentes de pNPP, la formation de produit pNP démarre à une vitesse différente. Bien évidemment, plus la concentration de pNPP est élevée plus la vitesse de formation de pNP sera rapide. Ainsi on observe que l’enzyme suit un mécanisme de type Michaelien….
II-Influence de la concentration du substrat sur la vitesse de la réaction
Détermination de l’activité enzymatique ????
III- Etude d’un phénomène de compétition entre deux substrats
Partie de Georges.
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